質粒轉化實驗說明

基本原理 ：

將質粒 DNA 導入xi菌的過程稱為轉化（ Transformation ）。此感受態xi菌細胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀（感受態xi菌的制備，見前）。質粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復合物黏附于xi菌表面，經 42℃ 短時間熱沖擊處理，促進細胞吸收 DNA 復合物。在豐富培養基上生長數小時后，球狀細胞復原并分裂增殖。被轉化的xi菌中，外源基因得到表達。在選擇性培養平板上，可選出所需的轉化子（即含有質粒 DNA 的xi菌）。鈣處理的感受態細胞，一般每微克 DNA 能獲得 10 5 ～ 10 6 個轉化子。除化學方法轉化xi菌外，還有電穿孔法（ Electroporation ），其轉化率可高達 10 9 ～ 10 10 個轉化子 /μg 質粒 DNA 。

器材 ：

1 ．培養皿 2 ．恒溫培養箱

試劑 ：

1 ． LB 培養基

2 ．選擇性 LB 瓊脂培養平板（含氨芐青霉素，終濃度為 50μg/ml ）

3 ．氨芐青霉素 100 mg/ml

4 ．宿主xi菌：經 100 mmol/L CaCl 2 處理的感受態xi菌 DH5α

 操作步驟 ：

 取 50 μL 大腸桿菌感受態細胞，加入適量質粒（體積不得超過 4 μL ）冰浴 30 min 后， 42℃ 熱激 90 s ，馬上放回冰上，冰浴 2 min ；加 400 μL LB 培養基，于 37℃ 搖床慢搖振蕩培養 45-60 min ；取 50-100 μL 涂在含有氨芐青霉素（ 100 μg/mL ）的 LB 固體培養基上， 37℃ 倒置培養過夜。