質粒轉化實驗說明
基本原理 :
將質粒 DNA 導入xi菌的過程稱為轉化( Transformation )。此感受態xi菌細胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀(感受態xi菌的制備,見前)。質粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復合物黏附于xi菌表面,經 42℃ 短時間熱沖擊處理,促進細胞吸收 DNA 復合物。在豐富培養基上生長數小時后,球狀細胞復原并分裂增殖。被轉化的xi菌中,外源基因得到表達。在選擇性培養平板上,可選出所需的轉化子(即含有質粒 DNA 的xi菌)。鈣處理的感受態細胞,一般每微克 DNA 能獲得 10 5 ~ 10 6 個轉化子。除化學方法轉化xi菌外,還有電穿孔法( Electroporation ),其轉化率可高達 10 9 ~ 10 10 個轉化子 /μg 質粒 DNA 。
器材 :
1 .培養皿 2 .恒溫培養箱
試劑 :
1 . LB 培養基
2 .選擇性 LB 瓊脂培養平板(含氨芐青霉素,終濃度為 50μg/ml )
3 .氨芐青霉素 100 mg/ml
4 .宿主xi菌:經 100 mmol/L CaCl 2 處理的感受態xi菌 DH5α
操作步驟 :
取 50 μL 大腸桿菌感受態細胞,加入適量質粒(體積不得超過 4 μL )冰浴 30 min 后, 42℃ 熱激 90 s ,馬上放回冰上,冰浴 2 min ;加 400 μL LB 培養基,于 37℃ 搖床慢搖振蕩培養 45-60 min ;取 50-100 μL 涂在含有氨芐青霉素( 100 μg/mL )的 LB 固體培養基上, 37℃ 倒置培養過夜。